克日，，，，， ，，中山大学中山眼科中心教授张秀兰团队与剑桥大学教授Patrick Yu-Wai Man相助，，，，， ，，使用CRISPR-Cas9基因编辑手艺靶向敲除碳酸酐酶2（Car2）基因，，，，， ，，在小鼠模子上单次给药获得一连降低眼压两个月以上的显著作用，，，，， ，，为青光眼提供了广谱、长效降低眼压基因治疗的可能性。。。。。相关效果揭晓于《细胞报道医学》。。。。。
“我们突破了古板基因治疗研究框架，，，，， ，，从临床现实需求出发，，，，， ，，寻找到适合所有青光眼类型的Car2基因举行广谱基因治疗研究。。。。。”论文配合通讯作者张秀兰体现，，，，， ，，该研究效果具有极大的临床转化潜力，，，，， ，，基因编辑药物有望替换古板药物治疗手段，，，，， ，，实现“One shot gene therapy——单次给药，，，，， ，，长效降压”的目的，，，，， ，，为所有类型的青光眼患者减轻疾病肩负。。。。。
青光眼是全球规模内第一大不可逆致盲性眼病。。。。；；； ；；；虮嗉芄惶峁┑ゴ胃稍ぁ⒊ばе瘟频目赡，，，，， ，，是青光眼理想的治疗工具。。。。。张秀兰团队历经3年多时间的潜心研究，，，，， ，，从临床降眼压药物的作用机制出发，，，，， ，，寻找到适合所有青光眼类型的Car2基因举行广谱基因治疗研究，，，，， ，，使用CRISPR-Cas9手艺敲除Car2基因，，，，， ，，通过单次玻璃体腔注射，，，，， ，，在小鼠模子中获得长达两个月的降眼压效果，，，，， ，，为青光眼提供了广谱基因疗法的可能性。。。。。
张秀兰团队首先针对小鼠Car2基因设计了六条sgRNA序列，，，，， ，，并在体外使用T7E1实验连系深度测序手艺评估各sgRNA的基因编辑效率。。。。。为了进一步提高基因编辑效率，，，，， ，，团队筛选出两条sgRNA并构建双靶点CRISPR系统，，，，， ，，效果批注基因编辑效率被显著提升至97.3%。。。。。接着，，，，， ，，为了验证Car2基因敲除是否能够降低眼压，，，，， ，，该团队将双靶点CRISPR系统包装至ShH10血清型的腺相关病毒（AAV）载体中。。。。。ShH10-AAV对认真房水天生的睫状体组织有很高的亲和性。。。。。通过单次玻璃体腔注射，，，，， ，，团队证实双靶点CRISPR系统能够靶向睫状体组织，，，，， ，，镌汰CAR2卵白的表达。。。。。眼压监测效果也批注Car2基因敲除能够显著降低正常小鼠的基线眼压，，，，， ，，相较于比照组镌汰约3mmHg，，，，， ，，并且一连两个月以上。。。。。
为了进一步探索Car2基因敲除对青光眼的治疗效果，，，，， ，，研究团队接纳了DBA/2J小鼠和磁珠诱导慢性高眼压模子两种实验性青光眼模子。。。。。效果批注Car2基因敲除能够显著降低青光眼模子小鼠的眼压，，，，， ，，并且能够延缓甚至阻止高眼压带来的组织学损伤。。。。。别的，，，，， ，，在慢性高眼压模子中，，，，， ，，以临床常用降眼压药物派立明（布林佐胺）滴眼液作比照，，，，， ，，发明Car2基因敲除降眼压效果要略优于派立明，，，，， ，，该发明极大增进了基因编辑药物替换古板药物治疗青光眼的可能性。。。。。
只管眼球依附“免疫宽免”是理想的基因治疗靶器官，，，，， ，，但由于AAV病毒缺乏组织特异性，，，，， ，，无法阻止视网膜的转染，，，，， ，，因此张秀兰团队通过组织学和功效学评估Car2基因敲除的清静性和潜在副作用。。。。。OCT以及ERG效果批注，，，，， ，，Car2基因敲除未引起潜在的不良反应。。。。。
